测定DNA含量用什么方法?
组成分子的碱基,均具有一定的吸收紫外线特性,吸收值在波长为~270nm之间.的吸收波长是260nm,这个物理特性为测定溶液浓度提供了基础.
测定DNA含量用什么方法?测定蛋白质的方法有哪些?
测定DNA含量用什么方法?测定蛋白质的方法有哪些?
测定DNA含量用什么方法?测定蛋白质的方法有哪些?
在波长260nm紫外线下,1OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml;单链DNA或RNA为20μg/ml.可以次来计算样品的浓度.
分光光度法不但能确定的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值(A260/A280)估计的纯度.DNA的比值为1.8,RNA的比值为2.0.若DNA比值高于1.8,说明制剂中RNA尚未除尽.RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白质将导致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干扰.当然也会出现既含蛋白质又含RNA的DNA溶液比值为1.8的情况,所以有必要结合凝胶电泳等方法鉴定有无RNA.或用测定蛋白质的方法检测是否存在蛋白质.紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25μg/ml的溶液.对于很稀的溶液可采用荧光光度法.
qubit测定dna浓度
Qubit是一种常用于生物分子测量的荧光分析系统,其中包括测定DNA浓度的工具。下面是使用Qubit测定DNA浓度的步骤:
准备样品:将待测DNA溶解在缓冲液中,并且保证样品均匀混合。
测定DNA含量用什么方法
测定DNA含量用分光光度计检测法。
检测步骤如下:
1、预热紫外分光光度计10-20分钟。
2、取所需的比色杯,其中一只装入3毫升水溶液,作为空白液,用来校正分光光度计零点及调整透光度至100。
3、 DNA含量的测定:取3微升的DNA样品加入比色杯,加蒸馏水至3000微升,混匀;将比色杯置入分光光度计中,调入射光波长,分别用空白溶液调整零点,测待测样品在260纳米、280纳米、230纳米的OD值。
DNA浓度鉴定纯度鉴定方法有哪些
你是刚刚入学的研究生,还是只是有兴趣了解一下?如果是前者的话,实验室一般采用的是Thermo Fisher Scientific专门测DNA,RNA,蛋白浓度的仪器nanodrop,可以测浓度纯度(ng/ul)和纯度(采用特殊波长OD值的比值)。另外,还有其他相应的仪器,有兴趣的话可以自己查一查,目前用nanodrop较常见。如果只是有兴趣了解一下,用不着这么的仪器,用很多化学方法自己都可以测出来。
紫外吸收检测DNA的浓度和纯度原理是什么?
的吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值(OD260/OD280),估计的纯度。纯净DNA的比值为1.8,
测DNA含量绘标准曲线时,怎么算DNA的浓度
测DNA含量绘标准曲线时,算DNA的浓度的方法:
先把标准品的浓度和每个标准品的吸光度用Excel生成标准曲线,同时得到公式。
测量每个样本的吸光度。
把吸光度代入公式,计算出对应的浓度.如果样本有稀释,还要乘以稀释倍数。
DNA及RNA含量测定方法:
取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到lml。
用lml水做空白。
把样品杯放在分光光度计比色槽上。
每ul中DNA或RNA浓度(ug)将是OD值的10倍,例如稀释后样品在260nm处OD值为0.2,则原DNA或RNA样品浓度为2ug/ul。
如果想要检测样品的纯度,那么还要再测一次280nm处OD值,计算二者的比率,若比率接近2,则说明样品中比较纯。若比率小于1.6,则说明蛋白或其它吸收此波长的杂质在其中,建议再用酚/抽提继以乙醇沉淀以除去杂质。
如果想检测样品中是否残存酚等有机杂质,那么还要测定一次230nm处OD值。
DNA制品可用哪几种方法测定其含量,试从原理,准确性方面加以比较
测定DNA浓度的方法有两种,即利用分光光度计法测定DNA的紫外光吸收值;另一种方法是测定样品中溴化乙锭发射的荧光的强度来计算的含量.
紫外光吸收法:因为组成的碱基(G,A,T,C)在260nm处具有强吸收峰,所以通过测定260nm的吸收峰即可对DNA进行定量.但有时也会因为所处溶液的pH值不同而导致吸光系数的不同.因此,一般在中性pH值左右的环境中进行测定.这种方法常用于测定比较纯的样品.
溴化乙锭荧光强度法:当DNA含量很低以及样品中杂质含量高时,会影响紫外光吸收值的测定,这时,可以采用测定嵌入DNA中溴化乙锭分子受紫外光激发而发射出的荧光强度,因为这种荧光的强度与DNA总质量数成正比.